Kandungan

• Arahan
• Memulihkan lajur
• Bagaimana
• Notis
• Apa yang anda perlukan

Kromatografi Cecair Prestasi Tinggi (HPLC) adalah satu kaedah analisis makmal biasa di mana satu sampel dipisahkan ke dalam komponen kimianya apabila ia melewati suatu lajur. Lajur ini dipenuhi dengan bahan berliang, biasanya gel silika. Lajur fasa terbalik standard, seperti C8, kadang-kadang boleh menyumbat atau menjadi tercemar. Lajur ini boleh diambil menggunakan teknik yang sangat mudah.

Arahan

Pelarut yang betul dapat memulihkan lajur yang kotor (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Memulihkan lajur

1. Menanggalkan lajur dan membalikkan kedudukannya, supaya fasa bergerak kini memasuki apa yang biasanya output lajur. Lampirkan salur keluar ke hujung lajur yang lain (yang merupakan kemasukan asal), dan biarkan ia mengalir keluar.

2. Pam siri pelarut untuk mengurangkan kekutuban. Suatu siri asas yang disyorkan adalah bermula dengan metanol, kemudian bertukar menjadi acetonitril, kemudian asetonitril / isopropanol (75:25), isopropanol, metilena klorida dan heksana. Sekiranya fasa mudah alih yang berada di dalam lajur menyerap, satu laluan dengan air sebelum di methanol disyorkan. Aliran satu hingga dua mililiter per minit cukup, dan kira-kira sepuluh jilid jumlah setiap pelarut harus dipam. Lajur isipadu adalah ruang dalaman lajur, dan dikira oleh (0.7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), di mana DI adalah diameter dalaman lajur dan L adalah panjang.

   
   

3. Kumpulkan sepuluh jilid isopropanol melalui lajur untuk menyediakannya dengan fasa mudah alih asal. Sekiranya fasa mudah alih asal telah dicadangkan, juga pam air melalui tiang selepas isopropanol, sebelum kembali ke fasa mudah alih asal.

4. Menanggalkan lajur, membalikkannya dan melibatkan semula supaya ia berada dalam kedudukan asalnya (supaya fasa bergerak masuk ke sebelah kanan lajur). Sambung semula output speaker ke pengesan.

Bagaimana

• Sekiranya proses ini tidak benar-benar membersihkan lajur, campuran 50:50 dimetil sulfoksida (DMSO) dan dimetil formamide (DMF) boleh digunakan. Residu protein dan ion logam mungkin memerlukan pelarut jenis lain, seperti reagen ion-sparing atau larutan asid etilena diamine tetra-asetik (EDTA).

Notis

• Dalam sesetengah peralatan, tulang belakang akan mempunyai penyaring logam yang kasar sebagai kemasukan. Dalam kes ini, membalikkan lajur akan membenarkan fasa pegun meninggalkan lajur, dan ini tidak digalakkan. Rujuk penjual anda jika anda tidak pasti.
• Pelarut yang digunakan dalam proses ini berpotensi toksik apabila ditelan dan dihirup. Gunakan langkah berjaga-jaga makmal biasa semasa mengendalikan.

Apa yang anda perlukan

• Peranti HPLC
• Air
• Methanol
• Acetonitrile
• Isopropanol
• Methylene chloride
• Hexane