Kandungan
Ahli mikrobiologi mengkaji ciri-ciri mikroorganisma, seperti alga, bakteria, protozoa, kulat dan virus, menggunakan mikroskop. Walaupun beberapa organisma, seperti sel protozoa dan ragi mudah dilihat melalui slaid, sel bakteria memerlukan pewarnaan. Para saintis telah mengembangkan beberapa kaedah, seperti teknik pewarnaan Gram, pewarnaan tahan asid dan pewarnaan pendarfluor untuk meningkatkan visualisasi sel bakteria dan struktur sel. Dengan menggunakan kaedah pewarnaan seperti itu, adalah mungkin untuk mengenal pasti ciri-ciri struktur yang membantu mengklasifikasikan bakteria.
Lebih baik melihat
Organisma bakteria sangat kecil sehingga kebanyakannya hanya dapat dilihat di bawah mikroskop dengan daya pembesaran 1000 kali. Walau bagaimanapun, peningkatan saiz yang sederhana tidak memberikan tahap kejelasan yang mencukupi, oleh itu bakteria mesti diwarnai sebelum pemerhatian untuk memberikan kejelasan yang diperlukan untuk visualisasi.
Pengenalan dan pengelasan
Pewarnaan bakteria untuk membezakan antara jenis bakteria dikenali sebagai pewarnaan berbeza. Gram stain adalah noda pembezaan yang membezakan bakteria bergantung pada kandungan dinding sel. Dalam kaedah ini, sel bakteria bertindak balas dengan pewarna kristal ungu untuk bertukar menjadi violet. Melalui penambahan agen pemutihan, beberapa sel bakteria kehilangan warna, sementara yang lain tidak. Melalui penambahan pewarna safranin, sel yang berubah warna menjadi merah, sementara sel bakteria yang tidak kehilangan warna tetap berwarna ungu. Sel yang bertukar menjadi merah dipanggil organisma gram negatif dan sel yang tidak berubah menjadi merah diklasifikasikan sebagai organisma gram positif. Teknik pewarnaan Gram menyediakan kaedah cepat untuk mengenal pasti awal bakteria yang terlibat dalam jangkitan. Begitu juga, proses pewarnaan tahan asid membantu secara khusus mengenal pasti organisma yang tergolong dalam kelas bakteria yang disebut mycobacteria, seperti Mycobacterium tuberculosis.
Pengesanan kemungkinan
Dalam sampel kultur bakteria, selalunya penting untuk mengesan kehadiran sel bakteria hidup. Kaedah seperti pewarnaan pendarfluor membantu untuk mengenal pasti sama ada kultur sel dapat dilaksanakan atau tidak. Bakteria hidup mempunyai keupayaan untuk menukar tetrazolium 5-cyano-2,3-ditolyl chloride (CTC) menjadi pewarna yang menunjukkan pendarfluor merah. Oleh itu, apabila kultur berwarna CTC memancarkan pendarfluor ini, ini menunjukkan adanya bakteria yang berdaya maju. Propidium iodida adalah noda yang hanya bertindak pada sel-sel bukan hidup yang mempunyai kerosakan pada membran dan oleh itu berguna dalam mengenal pasti sel-sel bakteria mati.
Pengenalpastian struktur selular
Pewarnaan memberikan kaedah visualisasi yang jelas dari pelbagai struktur sel. Sebagai contoh, kaedah pewarnaan Feulgen memungkinkan pengenalan nukleus di dalam sel bakteria, sementara pewarnaan Albert berguna dalam memvisualisasikan butiran metakromatik. Begitu juga, teknik impregnasi perak membolehkan pengenalan spirochetes. Flagella mudah diperhatikan ketika mereka diwarnai dengan pewarnaan Ryu. Pewarnaan hijau malachite membantu mengenal pasti spora bakteria.
